Beta qlükan

Tətbiq və prinsip

Tətbiq və prinsip This procedure is used to determine Beta glucan activity of enzyme preparations derived from Aspergillus niger var. and Bacillus subtilis var. The assay is based on a 15-min hydrolysis of lichenin substrate at 40°and at pH 6.5. The increase in reducing power due to liberated reducing groups is measured by the neocuproine method.

Reaktivlər və həllər
Fosfat tamponu 13.6 g monobazik kalium fosfatı təxminən 1900 ml suda həll edin, pH 6.5 ± 0.05 olana qədər% 70 sodyum hidroksid məhlulu əlavə edin, sonra həllini 2000 ml həcmli bir kolbaya köçürün, su ilə sulandırın və qarışdırın. .
Neokuproin məhlulu A 40.0 q susuz sodyum karbonat, 16.0 g qlisin və 450 mq kubik sulfat pentahidratı 600 mL suda həll edin. Solüsyonu 1000 ml həcmli bir kolbaya köçürün, su ilə həcmdə seyreltin və qarışdırın.
Neokuproin məhlulu B 600 mq neokuproin hidroxloridi təxminən 400 mL suda həll edin, məhlulu 500 ml həcmli bir kolbaya köçürün, su ilə sulandırın və qarışdırın. Sarı rəng inkişaf etdikdə atın.
Likenin substratı 150 mq likenini (Sigma Chemical Co., Kataloq No. L-6133 və ya ekvivalenti) bir havanın içərisindəki incə bir toz halına gətirin və təxminən 50 ml suda təxminən 85 ° -də həll edin. Çözüm tamamlandıqdan sonra (20 ilə 30 dəq), 90 mq natrium borohidrid əlavə edin və 1 saat qaynama nöqtəsinin altında istiləşməyə davam edin. 15 g Amberlite MB-3 və ya ona bərabər tutulan ion dəyişdirmə qatranı əlavə edin və 30 dəqiqə davamlı qarışdırın. Bucner huni içərisində Whatman No. 1 filtr kağızı və ya ona bərabər tutulan bir vakum köməyi ilə süzün və kağızı təxminən 20 ml su ilə yuyun. Süzüntüyə 680 mq monobazik kalium fosfat əlavə edin və 0.22 µm Millipore filtr yastığı və ya ekvivalenti ilə yenidən süzün. Yastığı 10 ml su ilə yuyun və filtratın pH-sını 1 N sodyum hidroksid və ya 1 N xlorid turşusu ilə 6,5  ± 0,05-ə qədər tənzimləyin. Süzüntüyü 100 ml həcmli bir kolbaya köçürün, su ilə həcmdə seyreltin və qarışdırın. 3 gündən çox olmayan müddətdə 2 ° -dən 4 ° -ə qədər saxlayın.
Qlükoza Standart məhlulu Fosfat Tamponunda 36.0 mq susuz dekstrozu 1000 ml həcmli bir kolbada həll edin, su ilə həcmdə seyreltin və qarışdırın.
Test hazırlığı Enzim hazırlama nümunəsindən bir həll hazırlayın ki, 1 ml son seyreltmə 0,01 ilə 0,02 Beta qlükan vahidi arasında olsun. Nümunəni çəkin, uyğun ölçülü bir kolbaya köçürün, Fosfat Tamponu ilə həcmdə seyreltin və qarışdırın.

Prosedur
25 ml-də bitmiş dörd ayrı sınaq borusunun hər birinə 2 ml likenin substratı qoyun və tarazlaşdırmaq üçün boruları 40 ° -də su banyosunda qızdırın.
Tarazlıqdan sonra boruya 1 (substrat boşluğu) 1 ml fosfat tamponu, boruya 2 (qlükoza standartı) 1 ml qlükoza standart məhlulu, 4 ml Neokuproin A məhlulu və 1 ml test hazırlığının boruya 3 (ferment boşluğuna) əlavə edin. ) və 1 ml test hazırlığının boruya 4 (nümunə). Tampon boşluğu üçün beşinci bir boru hazırlayın və 3 ml Fosfat Tamponu əlavə edin.
Beş boruyu 40 ° -də dəqiq 15 dəqiqə inkübe edin və sonra 1, 2, 4 və 5 borulara 4 ml Neocuproine Solüsyonu A əlavə edin. Bütün beş boruya 4 ml Neocuproine Solüsyonu B əlavə edin və hər birinə uyğun bir qapaq qoyun. ölçülü şüşə mərmər.
[DİQQƏT: Rezin tıxaclardan istifadə etməyin. ]
Boruları güclü bir şəkildə qaynayan su banyosunda düz 12 dəqiqə qızdırın, rəng inkişaf etdirin, sonra soyuq suda otaq temperaturuna qədər soyudun və hər birinin həcmini su ilə 25 ml-ə qədər tənzimləyin. Boruları Parafilm və ya digər uyğun bir qapaqla örtün və bir neçə dəfə ters çevirərək qarışdırın.
Hər bir məhlulun 1 sm-lik hüceyrələrdə 450 nm-də, uyğun bir spektrofotometrlə, 5-ci borudakı bufer boşluğuna qarşı udma qabiliyyətini təyin edin.

Hesablama
Bir Beta qlükan vahidi (BGU), analiz şəraitində azaldıcı şəkəri (qlükoza ekvivalenti kimi) 1 µmol / dəq nisbətində azad edəcək ferment miqdarı olaraq təyin olunur.
Analiz üçün alınan ferment preparatının fəaliyyətini aşağıdakı kimi hesablayın:
BGU = [(A4 A3) × 36 × 106] / [(A2 A1) × 180 × 15 × µg örnek]

burada A4 nümunənin udma qabiliyyəti (boru 4), A3 ferment boşluğunun udma qabiliyyəti (boru 3), A2 qlükoza standartının udulmasına (boru 2), A1 substrat boşluğunun udulmasına (boru) 1), 36, Qlükoza Standart məhlulundakı qlükoza mikroqramı, 106, mikroqramı qrama çevirən amildir, 180, 1 olmol qlükozanın ağırlığı və 15, dəqiqələr içində reaksiya müddətidir.

ANALİZ SERTİFİKATI

* Yuxarıda göstərilən məlumatlar bu məhsulun istehsalçısından Newgen Biotech-ə verilən məlumatların birbaşa tərcüməsidir. Bu Analiz Sertifikatı məlumat məqsədləri üçün istifadə olunmalıdır və bu məhsulun alıcısı tərəfindən ciddi keyfiyyətə nəzarət təhlili əvəzedicisi kimi nəzərdə tutulmayıb.

Qablaşdırma və saxlama

Qatı qida qablaşdırma torbası, 25 kq / barel.

Quru, sərin və yaxşı havalandırılan yerlərdə günəşdən uzaq yerdə saxlayın, istilənin.

Ödəniş :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Ticarət Zəmanəti, VISA, MasterCard, e-Checking, Sonra Ödənin, LC və s.